Размер шрифта
Цвета сайта
Изображения

Обычная версия сайта

Кровь на пцр


Анализ крови на ПЦР – что это такое, суть метода, показания к назначению, расшифровка анализа крови ПЦР

Диагностика инфекционных заболеваний – бактериальных и вирусных – направлена на раннее выявление возбудителей, что позволяет назначать раннюю и максимально эффективную терапию. Самым современным способом диагностики инфекций является ПЦР или полимеразная цепная реакция. Так что же это за метод, и для чего он нужен?

Суть полимеразной реакции

Любой микроорганизм и вирус содержат в своей структуре молекулы ДНК или РНК. У каждого из них эти соединения уникальны, поэтому, если выделить в анализе крови у детей или взрослых нуклеиновые кислоты, можно с абсолютной точностью поставить диагноз.

К сожалению, концентрация ДНК в образцах крови или других биологических материалах достаточно низка и с помощью обычных методов диагностики определить ее не получается. Чтобы справиться с этой проблемой, была изобретена полимеразная цепная реакция.

Сущность ПЦР заключается в специальной обработке образца крови, в результате чего в ней увеличивается концентрация ДНК молекул, определение типа которых в дальнейшем позволяет установить вид возбудителя и поставить диагноз.

Как сдать кровь на ПЦР

При подготовке к анализу следует придерживаться общих рекомендаций: не пить и не есть непосредственно перед анализом крови. Хотя для сдачи крови на ПЦР можно так строго не придерживаться этих требований, так как точность исследования не зависит от того, на сытый или голодный желудок был взят анализ.

Какие заболевания можно выявить с помощью ПЦР

С помощью ПЦР можно выявить практически любые вирусные и бактериальные заболевания. Для анализа используется не только кровь, но и другие биологические материалы: сперма, слюна, мазки из уретры и с шейки матки. Анализ крови будет информативен в том случае, если возбудитель конкретного заболевания проникает в кровь человека. Поэтому ПЦР крови назначают при следующих заболеваниях:

  • вирусные гепатиты А, В, С, D и TT;
  • цитомегаловирус;
  • герпетическая инфекция (вирусы герпеса 1, 2 и 4-го типов);
  • ВИЧ-инфекция
  • энтеровирусная инфекция;
  • опоясывающий лишай;
  • краснуха;
  • токсоплазмоз;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • листериоз.

Если же взять во внимание возможность проведения ПЦР других биоматериалов, то в список заболеваний, выявляемых с помощью ПЦР, следует добавить:

Особо актуально в настоящее время ПЦР анализа крови беременной на так называемые TORCH-инфекции: цитомегаловирус, токсоплазмоз, краснуху и герпесвирусную инфекцию. Связано это с тем, что упомянутые заболевания могут привести к аномалиям развития плода.

Преимущества ПЦР

  1. 100% точность диагностики – если в крови есть даже несколько фрагментов ДНК возбудителя, с помощью ПЦР они буду выявлены, и будет поставлен точный диагноз. Это главное отличие данного метода от других способов диагностики – ИФА, общего анализа крови и прочих.
  2. Специфичность. При проведении ПЦР отсутствует такое понятие, как ложноположительный или ложноотрицательный результат. В отличие от иммуноферментного анализа (ИФА).
  3. Возможность проведения анализа сразу на несколько возбудителей из одного образца биоматериала, что делает метод удобным для пациента – не нужно несколько раз сдавать анализ.
  4. Быстрота. Не нужно выделять и выращивать возбудителя на питательных средах, как это делается при бактериологическом исследовании. Результат может быть готов уже в день сдачи анализа.
  5. С помощью ПЦР выявляют возбудителей латентных заболеваний, когда возбудитель в организме есть, но он еще не вызвал заболевание, или когда пациент является носителем инфекции (гепатита или ВИЧ).
  6. Низкая стоимость. Цена анализа ПЦР на одного возбудителя составляет 250-500 рублей. Чуть дороже стоит полуколичественный анализ на вирусы – около 1000 рублей.

Недостатки анализа

ПЦР является высокотехнологичным методом исследованием и предъявляет высокие требования к оснащению лаборатории. Помещение, где делают анализ, обязательно должно быть оснащено фильтром биологической очистки, так как в воздухе постоянно присутствуют частицы кожи, слюны, содержащие в своем составе молекулы ДНК. Несоблюдение техники работы с биоматериалами может стать причиной неверного результата.

Анализ крови – расшифровка у взрослых (ПЦР)

Трактовка результатов этого исследования не представляет сложностей, потому что отсутствует таблица норм анализа крови на ПЦР. В бланке результатов могут фигурировать лишь две фразы:

  • отрицательный результат – возбудитель, на который проводился анализ, не выявлен;
  • положительный результат – в организме имеется возбудитель указанного заболевания.

Следует знать, что ПЦР может быть положительной даже при отсутствии клинических симптомов заболевания! Расшифровка анализа крови на ПЦР у детей не отличается от таковой у взрослых.

Кому нужно сдать анализ на ПЦР

Любой человек может сдать кровь для исследования. Прямым показанием для исследования является подозрение на инфекции передающиеся половым путем (хламидиоз, гарднереллез, ВИЧ-инфекция). При случайном незащищенный половом контакте только ПЦР поможет поставить диагноз на ранней стадии, если человек заразился каким-либо заболеванием. В обязательном порядке кровь на TORCH-комплекс сдают беременные женщины. А также женщины, только планирующие беременность.

Хотя ПЦР является максимально эффективным методом диагностики, зацикливаться только на нем не стоит. Обследование пациента при любом заболеваний должно носить комплексный подход. Если цепная полимеразная реакция позволяет выявить возбудителя, то серологическое исследование позволяет оценить эффективность лечения, реакцию организма на возбудителя и лекарства. Назначать все исследования должен врач по показаниям.

Увидеть, как выполняется анализ крови ПЦР,  вы сможете, просмотрев данный видео-обзор:

Гудков Роман, врач-реаниматолог

39,756 просмотров всего, 4 просмотров сегодня

(67 голос., средний: 4,27 из 5) Загрузка...

okeydoc.ru

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП). Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью. Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов. Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО  в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. 

Литература

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
  2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
  3. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
  4. http://ru.wikipedia.org/wiki

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

www.invitro.ru

Кровь методом ПЦР

Его преимуществом является возможность использования любого клинического материала для поиска инфекций. Некоторые клинические ситуации требуют исследования крови методом ПЦР. Этот метод диагностики отличается высокой достоверностью. Он практически никогда не дает ложноположительных результатов и позволяет обнаружить возбудителя даже при его минимальной концентрации в исследуемом материале.

ПЦР крови на герпес

Исследование крови ПЦР проводится обычно на 1 и 2 тип герпеса одновременно.

  1. тип вызывает в основном поражение губ.
  2. тип чаще поражает гениталии.

Но в редких случаях оба типа герпеса могут обнаруживаться как на губах, так и на гениталиях. Этот вирус не только вызывает крайне неприятные симптомы. Он еще опасен для беременных женщин, потому что провоцирует невынашивание плода или формирование уродств.

Показания к исследованию крови методом ПЦР на герпес:

  • высыпания на половых органах (пузырьки с жидкостью);
  • подготовка к беременности (сдают оба партнера);
  • признаки внутриутробной инфекции;
  • иммунодефицит;
  • профилактическое скрининговое обследование.

При выявлении вируса герпеса диагноз считается подтвержденным, так как ПЦР имеет чувствительность и специфичность, близкую к 100%.

Анализ крови методом ПЦР на туберкулез

ДНК микобактерий может определяться в выпоте, мокроте или смыве бронхов. Анализ крови методом ПЦР на туберкулез очень чувствительный. Поэтому может использоваться для выявления латентной инфекции, не имеющей симптомов. Чаще всего в качестве клинического материала используется мокрота. Пациент может собрать её в любое время.

Смывы бронхов или лаважную жидкость берет врач в условиях стационара. Исследование обычно проводится качественное. Микобактерия или определяется или нет. Так как возбудитель туберкулеза является однозначно патогенным микроорганизмом, его обнаружение методом ПЦР является основанием для установления диагноза.

Анализ крови на хламидии методом ПЦР

Чаще всего на хламидиоз исследуют мазок из уретры. Но не всегда воспалительный процесс при этом заболевании локализован в структурах урогенитального тракта. Хламидии могут поражать дыхательную систему, глаза, ЛОР-органы. Чаще всего в крови определяется фрагмент ДНК Chlamydophila pneumoniae.

Анализ сдают, если:

  • пневмония не поддается лечению медикаментозными средствами;
  • отмечается вялое клиническое течение воспалительного процесса;
  • длительное повышение температуры тела непонятного происхождения.

При обнаружении хламидий назначается этиотропная терапия для эрадикации возбудителя.

Анализ крови на паразитов методом ПЦР

К числу паразитарных заболеваний относятся болезни, вызванные:

  • простейшими одноклеточными микроорганизмами;
  • эктопаразитами (вши, клещи);
  • гельминтами.

Гельминтозы методом ПЦР не диагностируются. Для их определения применяются серологические методы диагностики, направленные на поиск антител в крови. Но анализ крови методом ПЦР может использоваться для обнаружения простейших. Таким способом диагностируется токсоплазмоз.

ПЦР также используется для определения трихомониаза, но кровь в качестве клинического материала не применяется.

Показания к диагностике крови методом ПЦР на токсоплазмоз:

Обычно проводится качественное исследование. Результат может быть положительным или отрицательным.

prosifilis.ru

Анализ ПЦР — самая точная диагностика на инфекции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее. НАЖМИТЕ, ЧТОБЫ ЗАПИСАТЬСЯ

Метод ПЦР  был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

  • гепатит C, B;
  • уреаплазмоз половых органов;
  • ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
  • хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
  • микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
  • бактериальный вагиноз;
  • кандидоз половых органов;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • туберкулез;
  • сальмонеллез;
  • туберкулез (легочные и внелегочные формы);
  • листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
  • цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную  инфекцию;
  • детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
  • ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Суть метода полимеразной цепной реакции

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах. ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

  • Универсальность. Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
  • Специфичность. ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
  • Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
  • Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
  • Возможность проведения количественного анализа. Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида  в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка 

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

  • Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
  • Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
  • С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

  • За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
  • За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
  • За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
  • Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
  • За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Мазок у мужчин

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

  • За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
  • Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
  • Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
  • Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

  • Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
  • Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
  • Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
  • Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
  • Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Как проводится тест ПЦР?

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

  • Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
  • Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
  • Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
  • Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
  • Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
  • Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии; соскобы и мазки со слизистых  для диагностики ЗППП; клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат. Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами. Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

  • Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
  • Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности. Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Точность расшифровки результатов ПЦР анализа

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

  • Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
  • Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
  • Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter

Поделиться ссылкой:

Tags: TORCH, анализы, анализы гинекология, анализы до беременности, анализы на инфекции, анализы урология, гарднереллез, герпес, инфекции, мазок, ПЦР, трихомониаз, уреаплазмоз, урология, хламидиоз

medcentr-diana-spb.ru

ПЦР-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Кстати Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

www.kp.ru

Исследование крови методом ПЦР

ПЦР – искусственная методика амплификации ДНК.

Способна обнаружить различные воспалительные и инфекционные заболевания на самом раннем сроке развития, до появления первых клинических признаков.

ПЦР представляет собой особый диагностический способ, который делится на несколько этапов:

  • Денатурация (плавление)
  • Гибридизация праймеров (отжиг праймеров)
  • Элонгация

Денатурация

Во время денатурации термоблок нагревают до 94-96 °С, чтобы растворить двойные спиральные цепи водородных связей.

В конце фазы денатурации последовательности ДНК и праймеры должны присутствовать в виде отдельных цепей.

Отжиг праймеров

После денатурации блок охлаждают в течение 30 секунд, это позволяет праймерам связаться с одноцепочечной матрицей.

Дальнейший отжиг проводят при температуре, которая составляет от 55 до 65 ° C.

Элонгация

После того, как была синтезирована новая цепь, температуру снова повышают.

В этом случае до определенной рабочей температуры ДНК-полимеразы (между 68 и 72 ° C), которая теперь начинает амплифицировать ДНК.

Продолжительность этой фазы, в свою очередь, зависит от длины воспроизводимой цепи, обычно длиться от 6 до 11 минут.

На сегодня существует более 10 разновидностей полимеразной реакции.

Однако в лабораторной практике чаще прибегают к качественному определению ПЦР и Real-time PCR.

 Как подготовиться к ПЦР крови

Подготовка является достаточно важным момент в исследовании любого биологического материала.

Соблюдая простые рекомендации, пациент повышает шансы получения максимального точного результата.

Подготовка к ПЦР и правила сдачи крови, следующие: 

  • Взятие биологического материала — крови, проводится в утреннее время, до 11-12 часов, на пустой желудок.
  • За час до посещения лаборатории разрешается выпить стакан очищенной воды без газа.
  • За 5-7 дней необходимо исключить прием медикаментозных средств. В случае невозможности отмены приема лекарства, об этом следует сообщить до взятия крови.
  • Забор материала для диагностики ПЦР желательно проводить до начала других исследований.

ПЦР крови в диагностике гепатита

В последнее время анализ крови на гепатиты методом полимеразной реакции (ПЦР) все чаще назначается пациентам с подозрением на заболевание.

Анализ крови на гепатит методом ПЦР дает возможность решить такие задачи:

  • Выявить протекающий инфекционный процесс на раннем сроке развития, в период сероконверсионного окна — до появления в организме антител.
  • Уточнить отсутствие вирусной патологии, когда другие иммуноферментные анализы предоставили неоднозначные результаты.
  • Обнаружить вирусоносителя среди серопозитивных пациентов.
  • Дает возможность точно определить тип гепатита.

Полимеразная реакция определяет ДНК вируса путем исследования образца венозной крови или пунктата печени.

Диагностика может определить гепатит как количественно, так и качественно.

Количественный анализ крови способом ПЦР дает понять врачу о вирусной нагрузке на организм, определяя количество частиц вируса.

Интерпретация (расшифровка) ПЦР крови на гепатит В или С может быть следующей:

Положительный результат 

  • Вируснаходится в стадии обострения или протекает в хронической форме. Выявление «дикого» штамма вируса.
  • Заражение вирусом гепатита В или С мутантного типа. (HBsAg: отрицательно, анти-HBcor: положительно).
  • Ложноположительное заключение (анти-HBcor: отрицательно).

Отрицательный результат

  • На данный момент инфицирование вирусом отсутствует.
  • Пребывание острой формы вируса в инкубационном периоде.
  • Период восстановления/выздоровления.

Исследование крови на гепатит методом ПЦР рекомендуется в случае:

  • Повышения уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартат-аминотрансферазы (АсАТ), выявленного в ходе биохимического анализа крови.
  • Как часть обследования перед подготовкой к зачатию или хирургическому вмешательству.
  • Когда пациент регулярно подвергается инъекциям внутривенного характера.
  • Если у пациента был незащищенный сексуальный контакт, особенно при наличии подозрений о протекающем вирусе у партнера.
  • Если у пациента присутствуют клинические признаки заболевания.

Анализ крови на гепатит С и другие типы методом ПЦР проводится с использованием метода Real-Time.

Провести диагностику уже можно спустя 14 дней после предполагаемого инфицирования.

ПЦР крови на герпетическую инфекцию 1-2 типа

Основные показания к сдаче ПЦР крови на герпес следующие:

  • Наличие острой стадии инфекционного процесса, выраженные клинические признаки.
  • Как часть исследования при подготовке к беременности или экстракорпоральному оплодотворению.
  • Обнаружение плацентарной недостаточности или признаков герпетического заражения плода.
  • При наличии у больного острых иммунодефицитных состояний, в том числе ВИЧ, при диагностировании заболеваний, имеющих клетки лимфоидной природы.
  • В качестве дифференциального исследования инфекций урогенитального тракта.
  • При появлении высыпаний в виде пузырьков неясной этиологии, без присутствия других клинических признаков заболевания.

Герпес первого и второго типа являются наиболее распространенными формами инфекции.

Оба типа рассматриваются как контагиозные заболевания, способные передаваться от одного человека к другому.

Герпетическая инфекция, вызванная первым типом, проявляется в виде пузырькового высыпания на губах.

Второй тип представляет собой инфекцию генитального характера, где основная локализация высыпаний — внешние половые органы.

В данном случае основной путь передачи — половой контакт, при этом, использование презерватива не дает гарантию защиты.

Расшифровка анализа полимеразной реакции на герпес:

  • Положительно: в организме имеется инфекция Herpes simplex.
  • Отрицательно: в организме отсутствует инфекция Herpes simplex.

Следует обратить внимание, что в редких случаях анализ крови методом ПЦР может предоставить ложноположительный результат.

Как правило, подобное случается при прохождении противовирусной терапии, что способствует снижению концентрации вируса в образце крови.

Анализ крови ПЦР методом на туберкулез

Туберкулез (ТБ) — это инфекционное заболевание, вызываемое бактериями из семейства микобактерий, которое насчитывает более 160 различных типов.

Безусловно, самой распространенной причиной туберкулезных инфекций у людей является микобактерия туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), обнаруженная Робертом Кохом.

Есть также несколько других видов бактерий, которые могут вызвать туберкулез, среди них, M. bovis и М. аfricanum.

Инкубационный период, то есть период до появления признаков туберкулеза после заражения занимает от шести до восьми недель.

Диагностика туберкулеза может быть осложнена из-за отсутствия выраженной клинической картины или присутствия неспецифических симптомов.

Длительный кашель, особенно в сочетании с ночным потоотделением и отхаркиванием, может указывать на туберкулез, особенно при наличии определенных факторов риска.

Прорывов в диагностике Mycobacterium tuberculosis является полимеразная реакция.

Она позволяет определить инфекцию на самой ранней стадии развития, когда патоген только начинает атаковать организм.

Суть методики ПЦР — выделить ДНК Mycobacterium tuberculosis из образца крови пациента, классифицируя микроорганизм.

Кроме того, анализ может выявить стадийность инфекционного процесса, что позволит определиться с терапевтической тактикой.

Анализ крови на туберкулез методом ПЦР не назначается пациенту, который проходит или недавно прошел лечение от данного заболевания.

Данная рекомендация связана с высоким риском получения ложноположительного результата.

Поскольку даже после терапии некоторое количество бактерий остается в организме.

Анализ крови на ВИЧ методом ПЦР

Вирус иммунодефицита человека или сокращенно ВИЧ, является одним из самых известных и угрожающих инфекционных заболеваний с момента его открытия в 1980-х годах.

Несмотря на тот факт, что до сих пор проводятся исследования относительно лечения ВИЧ, не существует пока лекарства или вакцины против данного вируса.

Игнорирование терапии ВИЧ-инфекции неизбежно приводит к СПИДу — синдрому приобретенного иммунодефицита.

За последние 30 лет ВИЧ стал настоящей пандемией, унесшей жизни около 28 миллионов человек.

Поэтому, своевременная диагностика вируса позволит минимизировать риски перехода заболевания в СПИД-стадию, что значительно продлит жизнь пациенту.

Особое значение в исследовании вируса иммунодефицита человека имеет полимеразная реакция — ПЦР.

Особенно диагностика важна в педиатрии, где в принципе невозможно обнаружить раннее течение вируса у детей без применения ПЦР.

Данное явление связано с тем, что ребенок, родившийся от матери с подобной патологией, уже имеет антитела к вирусу.

Полимеразная цепная реакция дает возможность провести дифференциальное исследование ВИЧ-статуса у новорожденного.

При проведении ПЦР в первые два дня и получении положительного результата, будет говорить об инфицировании ребенка еще в утробе матери.

Если результат получен отрицательный, но в течение двух недель после повторного анализа стал положительным — заражение произошло в момент прохождения плода по родовому пути.

Количественный анализ на ВИЧ проводится пациентам в качестве мониторинга терапии.

Диагностика позволяет обнаружить количество копий рибонуклеиновой кислоты, таким образом, определяя эффективность терапевтического воздействия.

На какой день после заражения анализ крови методом ПЦР может обнаружить ВИЧ?

Выявить присутствие в организме вируса можно спустя 5-10 дней после контакта с партнером, имеющим положительный статус ВИЧ.

Отрицательный результат считается достоверным в случае, если он был проведен спустя две недели после контакта с больным.

Однако дополнительно потребуется проведение ИФА.

Обнаружение Staphylococcus методом ПЦР

Staphylococcus aureus (S. aureus) является факультативно-патогенной бактерией высокой клинической значимости.

Может вызывать тяжелые инфекции, такие как сепсис или эндокардит.

Особенно у людей с ослабленным иммунитетом (например, в контексте химиотерапии, при врожденных иммунодефицитах, сахарном диабете).

Кроме того, увеличение заболеваемости мультирезистентными штаммами Staphylococcus aureus (MRSA) затрудняет успешное лечение антибиотиками.

Диагностика MRSA сегодня проводится микробиологическими и референтными лабораториями (учреждения, которые проводят тестирование в конкретной официальной области исследований).

Сегодня все чаще прибегают к использованию полимеразной реакции количественного типа или в реальном времени.

Анализ крови методом ПЦР на стафилококковую инфекцию позволяет быстро обнаружить патоген и определить штамм резистентного Staphylococcus.

В момент лечения или после него, пациенту может быть назначена молекулярная диагностика методом ПЦР Real-time для определения количественной концентрации патогена.

Анализ ПЦР на паразитарные инфекции

Сразу стоит отметить, что анализ крови методом полимеразной реакции (ПЦР) на обнаружение паразитов, эффективен не для всех видов патогенных микроорганизмов.

Наиболее высокая чувствительность метода отмечается при диагностике следующих паразитарных инфекций:

Амебная дизентерия вызвана амебой Entamoeba histolytica.

Инвазивный амебный колит и амебный абсцесс печени.

Не очень распространенные, но потенциально опасные для жизни заболевания среди путешественников в странах с низким уровнем социально-экономического развития.

Амебная дизентерия, также известная как амебиаз, часто протекает бессимптомно, симптомы варьируют от легкой диареи до тяжелой дизентерии.

Основная диагностика заключается в исследовании кала, в частности микроскопия опытной лабораторией, в результате которой можно обнаружить амебные цисты.

В последнее время все чаще прибегают к ПЦР для обнаружения ДНК патогена.

Полимеразная цепная реакция относительно E. histolytica имеет высокую специфичность.

Однако не может определить острое течение паразитарной инфекции от носительства.

Инфекционная болезнь, вызванная паразитом Toxoplasma gondii.

Человек действует как промежуточный хозяин возбудителя; конечным хозяином являются кошки.

При здоровой иммунной системе симптомов обычно нет, только иногда признаки гриппа и опухшие лимфатические узлы. Диагностика — анализ на антитела к токсоплазме, возможно, прямое обнаружение патогенных микроорганизмов при помощи ПЦР.

Получение положительного результата при анализе крови говорит о присутствие в организме острого токсоплазмоза.

Тем не менее, отрицательный результат не дает гарантии, что патогена в организме нет.

Скорее всего, следует тестировать другой биологический материал.

Беременные женщины, которые еще не перенесли токсоплазмозную инфекцию, поэтому не имеют антител к паразиту.

Они должны обратить особое внимание на рекомендуемые профилактические меры.

Трихинеллез является паразитарным заболеванием, вызываемым личинками Trichinella spiralis.

Употребляя в пищу сырое или недостаточно хорошо приготовленное мясо, паразиты могут попасть в организм человека.

Особенно опасна свинина, а также мясо других домашних или диких животных.

Человеческий трихинеллез диагностируется путем обнаружения личинок Trichinella (микроскопия) в биопсии мышц или других биологических материалах.

Часто используется ИФА для обнаружения антител к Trichinella spiralis.

Наиболее современным и часто используемым методом диагностики инфекции является ПЦР.

Метод позволяет обнаружить личинки трихинелл.

Интерпретация результатов исследования простая: «отрицательно» — нет инфекции; «положительно» — заражение имеется.

ИФА или ПЦР: что лучше?

Что собой представляет диагностика крови методом ПЦР, какие отличия от ИФА, и какое исследование выбрать?

Оба вида анализа достаточно широко применяются в лабораторном практике.

Более того, имеют высокую специфичность и точность, которая достигает 98-99%.

Какой именно анализ назначить пациенту, врач решает в индивидуальном порядке.

Нередко может рекомендовать обе диагностика для максимально эффективного мониторинга за состоянием здоровья больного.

Назначение анализа ИФА и ПЦР практически у всех пациентов вызывает множество вопросов.

Поскольку подобный диагностический комплекс кажется одинаковым.

Тем не менее, отличия имеются и вполне существенные.

Так, ИФА позволяет выявить не сам патогенный микроорганизм, а только антитела к нему, которые организм успел выработать.

Тогда как ПЦР определяет непосредственно тип патогена, а также его количество/концентрацию в организме.

Оба анализа являются высокоинформативными и высокоточными методами тестирования инфекционных агентов.

Однако ни ПЦР, ни ИФА нельзя назвать панацеей в исследовании заболеваний вирусной или бактериальной этиологии.

Они являются дополнением к другим лабораторным тестированиям.

Позволяя добиться точного результата при постановке диагноза и определении максимально эффективного лечения.

Для назначения и сдачи анализов крови методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

onvenerolog.ru

Что показывает анализ крови на ПЦР? Как подготовиться к анализу :

Диагностика инфекционных заболеваний разного типа – как вирусных, так и бактериальных – направлена на выявление возбудителей на ранней стадии, что даёт возможность назначить своевременное и особенно эффективное лечение. Самым современным методом обнаружения инфекций является ПЦР, который расшифровывается как полимеразная цепная реакция. В чём суть данного метода и с какой целью он проводится?

Сущность полимеразной реакции

В структуре любого вируса и микроорганизма содержатся молекулы РНК или ДНК. Характерно, что у каждого данные соединения являются уникальными, в связи с чем, выделяя в анализе крови у взрослых или у детей нуклеиновые кислоты, можно поставить диагноз с абсолютной точностью.

К несчастью, концентрация ДНК как в образцах крови, так и в иных биологических материалах, довольно низкая, поэтому посредством обыкновенных диагностических методов её не получается определить. Для того чтобы справиться с данной проблемой, в своё время изобрели цепную полимеразную реакцию.

Итак, сущность данного анализа заключается в специфической обработке кровяного образца, благодаря которой в ней повышается концентрация молекул ДНК, и установление их типа в дальнейшем даёт возможность выявить вид возбудителя, а также поставить верный диагноз.

Как проводится анализ крови на ПЦР

Метод ПЦР осуществляется только в лабораторных условиях. Чтобы его провести, используются особые ферменты, увеличивающие структуру РНК и ДНК пациента в несколько раз. При этом должно сформироваться такое их количество, чтобы стало возможным проведение визуального исследования. В течение обследования осуществляется копирование такого участка, который подходит под требуемые условия по всем параметрам. Что такое анализ крови ПЦР на РНК, интересно многим.

В лаборатории имеется в наличии необходимая база данных, где указывается точная структура разнообразных инфекционных агентов. Использование метода ПЦР позволяет не просто установить вид возбудителя, но и высчитать его количественную пропорцию.

ПЦР-диагностика включает в себя также и некоторые новшества, в числе которых выделяются следующие:

- соединение различных фрагментов ДНК;

- введение мутации;

- установление отцовства и т. п.

Какие заболевания выявляются благодаря ПЦР?

Благодаря ПЦР возможно выявление практически всех бактериальных и вирусных патологий. Для исследования может использоваться не только кровь, но и иные биологические материалы, такие как мазки из уретры и из маточной шейки, слюна, сперма. Анализ становится достаточно информативным тогда, когда возбудитель определённого заболевания попадает в кровь человека. Именно поэтому анализ крови на ПЦР назначается при следующих патологиях:

- вирусные гепатиты типа А, В, С, D и TT;

- инфекция герпетического характера (то есть вирусы первого, второго и четвёртого типов);

- цитомегаловирус;

- энтеровирусная инфекция;

- ВИЧ-инфекция;

- краснуха;

- листериоз;

- опоясывающий лишай;

- инфекционный мононуклеоз;

- токсоплазмоз.

Если принять во внимание осуществление ПЦР с помощью иных биоматериалов, то в перечень патологий, которые можно выявить благодаря данному способу, нужно добавить следующие:

- сальмонеллез;

- дифтерия;

- гарднереллез;

- микоплазмоз;

- туберкулез;

- трихомониаз;

- папилломавирусную инфекцию (около ста разнообразных штаммов вируса человеческой папилломы).

Особую актуальность приобрёл в настоящее время ПЦР-анализ крови в период беременности на TORCH-инфекции, к которым относятся токсоплазмоз, цитомегаловирус, герпесвирусная инфекция и краснуха. Это связано с тем, что вышеперечисленные заболевания способны вызвать отклонения в развитии плода.

Плюсы ПЦР

В чём же заключаются преимущества данного метода?

  • Стопроцентная точность диагностики: при наличии в крови хотя бы нескольких ДНК-фрагментов возбудителя они будут определены реакцией ПЦР, а значит, будет поставлен правильный диагноз. Именно в этом заключается основное отличие подобного метода от иных способов диагностики – общего анализа крови, ИФА и других.
  • Специфичность. Во время осуществления анализа крови ПЦР на боррелиоз, например, нет такого понятия, как ложноотрицательный или ложноположительный результат, что отличает его от иммуноферментного анализа, или ИФА.
  • Анализ можно проводить с целью определения сразу нескольких возбудителей на основе одного образца биоматериала, благодаря чему данный метод становится удобным для пациента, ведь ему не придётся сдавать анализ несколько раз.
  • Быстрота. Нет необходимости в выделении и выращивании возбудителя на особых питательных средах, что необходимо во время бактериологического обследования. Получить готовый результат можно уже непосредственно в день сдачи анализа.

  • Посредством анализа крови ПЦР на гепатит, к примеру, производится определение скрытого возбудителя заболевания в организме, когда пациент выступает в качестве носителя инфекции (ВИЧ или гепатита).
  • Доступная цена. Стоимость анализа ПЦР для определения одного возбудителя колеблется в пределах от двухсот пятидесяти до пятисот рублей. Полуколичественное обследование на вирусы стоит немного дороже – около тысячи рублей.

Недостатки метода

ПЦР представляет собой высокотехнологичный исследовательский метод, предъявляющий повышенные требования к лабораторному оснащению. Помещение для проведения анализа должно обязательно иметь фильтр биологической очистки, поскольку в воздухе всё время имеются частицы слюны и кожи, в составе которых содержатся молекулы ДНК. Если не соблюдать технические требования к работе с биоматериалами, то это способно стать причиной неправильного диагноза.

Кто должен сдавать анализ крови на ПЦР?

Пройти исследование может любой человек. Показанием к нему выступает подозрение на передающиеся половым путем инфекции (ВИЧ-инфекция, гарднереллез, хламидиоз). Если случайно произошёл незащищенный половой контакт, исключительно ПЦР позволит поставить верный диагноз ещё на раннем этапе, в случае если человек заразился тем или иным заболеванием.

Кровь на TORCH-комплекс в обязательном порядке сдаётся беременными женщинами, а также теми, кто пока только планирует зачать ребёнка.

Хотя ПЦР – это максимально эффективный способ диагностики, только на нём зацикливаться не нужно. Обследовать пациента при наличии любой патологии необходимо комплексно. Если цепная полимеразная реакция даёт возможность определения возбудителя, то благодаря серологическому исследованию можно оценить уровень эффективности терапии, реакцию организма человека на возбудителя и медикаментозные средства. Анализ крови ПЦР на ВИЧ должен назначаться врачом.

Особенности процедуры и подготовки

Пациенты, которые обследуются с помощью ПЦР-методики, получают самый достоверный результат. Нужно сказать, что при этом вероятность ошибок практически полностью исключается. Довольно быстро готовятся и результаты данного анализа, благодаря чему облегчается определение диагноза и становится возможным своевременное назначение необходимых лечебных процедур.

Достоверность результата, полученного методом ПЦР, обусловливается правильностью сдачи биологического материала на обследование. Он не должен быть чем-либо загрязнен, в противном случае результат не будет объективным. К числу важных рекомендаций перед проведением анализа относятся такие требования:

  • запрет на половые контакты за сутки до процедуры;
  • анализ крови для выявления инфекций нужно сдавать утром и только на голодный желудок;
  • моча также сдаётся в утреннее время в стерильный контейнер.

Через полтора или два дня после проведения процедуры будет произведена расшифровка анализа крови ПЦР и готов результат. Бывают даже такие случаи, когда получить результат можно в тот же день.

Как подготовить материал к анализу?

Для того чтобы максимально успешно провести исследование, необходимо правильно взять у пациента материал и провести грамотную его подготовку. Общеизвестным является тот факт, что в лабораторном исследовании большое количество ошибок (примерно до семидесяти процентов) случается как раз-таки во время пробоподготовки.

В настоящее время в некоторых лабораториях кровь берётся с помощью вакуумных систем. С одной стороны, они в минимальной степени травмируют пациента, с другой – дают возможность взять материал так, чтобы он не контактировал ни с окружающей средой, ни с персоналом. Благодаря этому можно избежать загрязнения биологического материала и максимально обеспечить достоверность анализа.

Расшифровка результатов

Результат анализа крови на ПЦР может быть положительным и отрицательным. Если анализ крови отрицательный, то это свидетельствует об отсутствии инфекционных возбудителей в сданном пациентом материале. Положительный анализ выступает подтверждением того, что в крови имеются инфекционные агенты, а значит, требуется в максимальной степени эффективное и качественное лечение пациента.

Полученный результат может быть положительным даже при отсутствии каких-либо симптомов заболевания. Это свидетельствует или о начале патологического процесса, или о том, что человек является носителем. В случае выявления последнего не требуются какие-либо лечебные процедуры. Пациенту в таком случае рекомендуется постоянно наблюдаться у врача, что подразумевает, например, периодическое исследование анализа крови ПЦР на герпес и другие инфекции.

Чаще всего они обнаруживаются в уретре, в соскобе, произведённом из цервикального канала, в слюне. Однако нужно помнить о том, что больной человек способен заразить совершенно здоровых людей, даже в том случае, если его никак не беспокоит данное заболевание. Оно может приобрести хронический характер. Нужно сказать, что при положительном результате, полученном с помощью ПЦР, необходимо назначение соответствующих лечебных процедур.

Количественная характеристика ПЦР

Анализ крови ПЦР на инфекции характеризуется ещё и количественно. Такой результат может оцениваться исключительно специалистом, поскольку для различных инфекций он индивидуален. Именно количественная характеристика позволяет врачу определить степень активности такого патологического процесса, определить точный этап развития определённого заболевания.

Исследование полученных результатов поможет специалисту выбрать соответствующее лекарственное средство, конкретизировать необходимую дозировку.

Точность диагностики

Выделяется три самых важных характеристики ПЦР, а именно:

- чувствительность;

- специфичность;

- точность.

Диагностика инфекций с помощью ПЦР отличается высокой вероятностью обнаружения в организме инфекционных агентов. Анализ крови и иных жидкостей является высокоспецифичным. Благодаря ему можно с лёгкостью определить конкретный инфекционный процесс, сдав, к примеру, анализ крови ПЦР на гепатит или ВИЧ. Также диагностика ПЦР отличается повышенной чувствительностью. При наличии в исследуемом материале минимального количества инфекционных агентов способ ПЦР всегда будет положительным.

В очень редких случаях может быть получен ложноположительный результат. При отсутствии инфекции он, соответственно, будет отрицательным.

Выявление скрытых заболеваний

При подозрении у человека ИППП назначается анализ крови на определение скрытых инфекций. Любые заболевания половой сферы можно определить только с помощью обследования пациента. Скрытый характер протекания могут иметь такие заболевания:

  • уреаплазмоз;
  • хламидиоз;
  • микоплазмоз;
  • герпес;
  • гонорея;
  • гарднереллез.

Данные инфекции являются достаточно распространёнными и очень коварными. В начале заболевания они не имеют хорошо выраженных симптомов, поэтому пациенты не обращаются к специалисту. Результаты своевременного анализа крови ПЦР на хламидии, боррелиоз и прочие инфекции помогут врачу назначить эффективное лечение.

ИППП отрицательно воздействуют на репродуктивную систему. Они могут стать причиной бесплодия либо появления у плода пороков. Именно поэтому важно перед планированием беременности сдать анализ ПЦР.

www.syl.ru


Смотрите также

 

2011-2017 © МБУЗ ГКП №  7, г.Челябинск.