Jak2 инвитро

Качественная оценка наличия соматической мутации V617F в 14 экзоне гена JAK2 (Qualitative assessment of presence of gene JAK2 617F somatic mutation)

Метод определения Real-Тime PCR.

Исследуемый материал Цельная кровь (с ЭДТА)

Уважаемые пациенты. Дни приема биоматериала уточняйте, пожалуйста, по телефону.

Диагностический критерий Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) для ХМПЗ. Молекулярно-генетическая диагностика.

Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) – заболевания, характеризующиеся избыточной пролиферацией (выработкой клеток) одного или нескольких ростков кроветворения. Нарушения возникают на уровне стволовых клеток. 

Классические Ph’-негативные ХМПЗ – группа болезней, включающая в себя эритремию (истинную полицитемию, ИП), эссенциальную тромбоцитемию (ЭТ) и идиопатический миелофиброз (ИМФ). Это хронические лейкозы с поражением на уровне клетки-предшественницы гемопоэза с характерной для опухоли неограниченной пролиферацией этой клетки, потомки которой дифференцируются по всем росткам кроветворения. При этом для эритремии свойственно преобладание красного ростка, для эссенциальной тромбоцитемии – мегакариоцитов и тромбоцитов. Классические ХМПЗ и некоторые другие менее распространенные миелопролиферативные заболевания чаще всего являются приобретенными, спорадическими нарушениями гемопоэза. 

Молекулярные события, лежащие в основе патогенеза ХМПЗ, связаны с дефектами генов, которые кодируют белки, ответственные за нормальное поддержание миелопоэза. Для всех ХМПЗ характерна аномальная тирозинкиназная активность. 

Белок JAK2 принадлежит семейству нерецепторных тирозинкиназ (Janus-киназ), которое включает в себя четыре белка: JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. Для гемопоэза особое значение среди них имеет киназа JAK2, которая осуществляет передачу сигнала не только от эритропоэтина, но и от тромбопоэтина и колониестимулирующего фактора гранулоцитов (G-CSF). Функция белков JAK заключается в том, что они служат промежуточным звеном между рецепторами на мембране клетки и сигнальными молекулами (цитокинами, факторами роста и пр. ). Эти молекулы, связываясь с рецепторами JAK-киназ на поверхности клетки, активируют их, что приводит к активации сигнальных путей с участием ряда белков, которые передают сигналы для транскрипции, пролиферации и дифференцировки бластных предшественников. 

При появлении соматической мутации¹ JAK2 (1849G/T (617V/F)) эти сигналы активируются автономно, независимо от связывания цитокина со своим рецептором, что приводит к избыточной пролиферации того или иного ростка клеток. Ген JAK2 расположен в локусе 9р24.1. Соматическая мутация 1849G/T (617V/F) выражается в замене нуклеотида G→T в позиции 1849 (четырнадцатый экзон), которая в свою очередь приводит к замене фенилаланина (F) на валин (V) в 617 позиции аминокислотной последовательности белка. 

JAK2 1849G/T (617V/F) является соматической мутацией, возникающей в гемопоэтических клетках-предшественницах. Она встречается у подавляющего большинства больных ХМПЗ, что делает эту мутацию очень удобным диагностическим маркером. Наличие точечной мутации JAK2 1849G/T (617V/F) – феномен, характерный исключительно для поражений миелоидного ростка, и не описан ни для солидных опухолей, ни для опухолей лимфоидного происхождения. 

______________________________________ 

¹ Мутация 1849G/T (617V/F) является соматической, т. е.: 

1. Возникает у человека спонтанно, а не передается по наследству от родителей.  
2. Мутантный аллель выявляется в основном в виде гетерозиготного генотипа. 
3. Возможно возникновение мутации через несколько лет после проведения данного анализа, следовательно, при необходимости целесообразно повторное проведение анализа.

Таблица 1. Молекулярные аномалии, связанные с «классическими» миелопролиферативными заболеваниями

Мутация JAK2 1849G/T (617V/F) – диагностический маркер, при помощи которого можно проводить первичную и дифференциальную диагностику ХМПЗ, а также молекулярный мониторинг минимальной остаточной болезни (количественный тест).

Алгоритм проведения молекулярной диагностики МПЗ (рис. 1)

Определение химерного онкогена BCR/ABL позволяет провести дифференциальный анализ хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) и Ph’-негативных МПЗ. Если в случае Ph’-негативных МПЗ мутация JAK2 1849G/T (617V/F) не найдена, то в случае ИП следует осуществить поиск мутаций в двенадцатом экзоне гена JAK2, а в случае ЭТ и ИМФ – мутаций MPL W515L/K. В случае отрицательного результата следует исключить возможность наследственных дефектов генов VHL, EPO-R, PHD2, THPO, MPL и генов глобинов. При редких видах МПЗ, негативных по JAK2 V617F, целесообразно осуществить поиск химерных онкотирозинкиназ. 

Сейчас молекулярное исследование входит в диагностические критерии ВОЗ 2008 г., а тест на наличие мутации JAK2 стал стандартным методом диагностики ХМПЗ. Выявление мутации указывает на наличие клонального ХМПЗ и исключает возможность реактивного эритроцитоза, тромбоцитоза или миелофиброза.

Таблица 2. Диагностические критерии ВОЗ для ХМПЗ (2008)

В настоящее время исследование на наличие мутации JAK2 1849G/T (617V/F) – необходимое условие для установления правильного диагноза и определения дальнейшей тактики ведения пациента.

Анализ на Маркер развития Ph-негативных хронических миелопролиферативных заболеваний (ХМПЗ): качественная оценка наличия соматической мутации 617F гена JAK2 в Санкт-Петербурге

Биоматериал и способ забора

Срок исполнения: до 14 дн.

Синонимы (rus)

Маркер развития Ph-негативных хронических миелопролиферативных заболеваний

При помощи данного теста определяются генетические факторы риска развития Ph’-негативных хронических миелопролиферативных заболеваний (ХМПЗ). Анализ включает в себя проведение качественной оценки наличия соматической мутации 617F гена JAK2, вызывающей болезни, которые характеризуются повышенной выработкой клеток одного, либо нескольких ростков кроветворения.

• не употреблять жирную пищу за несколько часов до сдачи анализа, желательно не есть в течение 4 ч.;
• незадолго до взятия крови выпить 1–2 стакана обычной негазированной воды;
• по возможности отказаться от приема лекарств минимум за сутки до сдачи анализов;
• при сдаче анализов на фоне приема лекарственных препаратов необходимо указать этот факт в направительном бланке;
• не заниматься спортом в день сдачи анализа;
• исключить повышенные эмоциональные нагрузки;
• за несколько минут перед взятием крови принять удобное положение (сесть), расслабиться, успокоиться;
• воздержаться от употребления алкоголя в течение 72 ч. до сдачи анализа;
• не курить как минимум за 30 мин. до взятия крови.

Взятие крови у детей до 7 лет

• Помните, что для сдачи анализа крови лучше всего подходит утреннее время, нормы всех анализов разрабатывались именно под временной интервал с 8 до 11 часов утра.
• Сдавать кровь для анализов следует строго натощак. Между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8-ми часов. С детьми этого правила придерживаться довольно сложно, но вполне возможно. Пить утром соки, чай, есть печенье — нельзя, это может значительно исказить результаты. Пить можно только воду. Возьмите с собой что-нибудь вкусное, чтобы сразу после выхода из процедурного кабинета была возможность поесть.
• Питание ребенка за 1-2 дня до анализа крови должно исключать жирную и жареную пищу, сладости.
• Для лучшего кровенаполнения сосудов желательно за 30 минут до забора крови дать ребенку выпить 100-200 мл воды (для детей с 1 года).
• После анализа подумайте, чем можно порадовать ребенка за хорошее поведение. Небольшой подарок-сюрприз поможет сгладить неприятные впечатления о больнице.

Взятие крови у детей от 1 дня до 12 месяцев

• Взятие крови на анализ у грудных детей постарайтесь подстроить под перерыв между кормлениями, ближе ко второму кормлению.
• За 30 минут до процедуры ребенок должен выпить 50 мл жидкости, которую вы ему обычно даете.
• В момент взятия крови руки ребенка обязательно должны быть теплыми. Если вы пришли с улицы или не так уж тепло в помещении, руки ребенка нужно согреть. Это обязательное и очень важное условие, ведь от его выполнения зависит количество крови, которое будет получено медработником.
• Непосредственно перед взятием крови ребенка нужно расположить так, чтобы ему было максимально комфортно. Должна пройти пара минут перед тем, как медсестра начнет брать кровь. Этого времени малышу хватит, чтобы успокоиться и немного привыкнуть к окружающему пространству.

Важно!
При необходимости выполнения исследования с использованием услуги CITO, упаковать пробу в отдельный пакет и промаркировать наклейкой CITO.

Рекомендации по забору и транспортировке

Вакуумная пробирка К2-ЭДТА (фиолетовая крышка), 6 мл

Обработка образца

• Перемешать 8-10 раз
• Выдержать 30-45 мин. при комнатной температуре
• Хранить и транспортировать образец при температуре +2…+8 °С

Хранение образца

при температуре +2…+8 °С

Транспортировка образца

при температуре +2…+8 °С

Исследование / 15-00-156

ПЦР анализ мутаций, делеций, инсерций в гене CALR

Срок

до 24 дн.

Цена

6 700 ₽

Исследование / 71-631

Скрининг миеломной болезни и парапротеинемий (иммунофиксация сыворотки крови с пентавалентной сывороткой)

Срок

до 7 дн.

Цена

2 470 ₽

Исследование / 15-00-57

Хронический миелолейкоз. FISH анализ химерного гена BCR/ABL

Срок

до 12 дн.

Цена

10 010 ₽

Исследование / 15-00-552

Ген рака молочной железы 1 (BRCA1). Выявление мутации 3819delGTAAA (нарушение структуры белка) Кровь (ЭДТА)

Срок

до 6 дн.

Цена

740 ₽

Спасибо, сообщение успешно отправлено!

Укажите точный адрес страницы, где вы заметили ошибку

Опишите ошибку как можно более подробно, чтобы мы смогли быстро ее исправить

При ошибках, связанных с предварительными заказами, убедительная просьба указывать список заказанных анализов, а также шаг оформления, на котором произошла ошибка.

Он может понадобиться для связи с вами, чтобы уточнить некоторые детали для исправления

Я согласен с условиями политики конфиденциальности

CYT387, селективный ингибитор JAK1/JAK2: оценка селективности киназ in vitro и доклинические исследования с использованием клеточных линий и первичных клеток пациентов с истинной полицитемией

Сравнительное исследование

. 2009 августа; 23 (8): 1441-5.

doi: 10.1038/leu.2009.50. Epub 2009 19 марта.

А Парданани ¹ , Т. Лашо, Дж. Смит, С. Дж. Бернс, Э. Фантино, А. Теффери

Принадлежности

принадлежность

• ¹ Отделение гематологии, клиника Майо, Рочестер, Миннесота 55905, США. [email protected]

• PMID: 19295546
• DOI: 10.1038/лей.2009.50

Сравнительное исследование

А Парданани и др. Лейкемия. 2009 авг.

. 2009 августа; 23 (8): 1441-5.

doi: 10.1038/leu.2009.50. Epub 2009 19 марта.

Авторы

А Парданани ¹ , Т. Лашо, Дж. Смит, С. Дж. Бернс, Э. Фантино, А. Теффери

принадлежность

• ¹ Отделение гематологии, клиника Майо, Рочестер, Миннесота 55905, США. [email protected]

• PMID: 19295546
• DOI: 10.1038/лей.2009.50

Абстрактный

Соматические мутации в Janus kinase 2 (JAK2), включая JAK2V617F, приводят к нарушению регуляции JAK-сигнального преобразователя и передачи сигналов активатора транскрипции (STAT), что вовлечено в патогенез миелопролиферативных новообразований (MPN). CYT387 представляет собой АТФ-конкурентную малую молекулу, которая сильно ингибирует киназы JAK1/JAK2 (IC(50)=11 и 18 нМ соответственно) со значительно меньшей активностью в отношении других киназ, включая JAK3 (IC(50)=155 нМ). CYT387 ингибирует рост клеток Ba/F3-JAK2V617F и клеток эритролейкемии человека (HEL) (IC(50) приблизительно 1500 нМ) или клеток Ba/F3-MPLW515L (IC(50)=200 нМ), но обладает значительно меньшей активностью в отношении BCR- ABL, содержащий клетки K562 (IC=58 000 нМ). Клеточные линии, несущие мутированные аллели JAK2 (CHRF-288-11 или Ba/F3-TEL-JAK2), ингибировались сильнее, чем соответствующие пары, несущие мутированные аллели JAK3 (CMK или Ba/F3-TEL-JAK3), и фосфорилирование STAT-5 ингибировался в клетках HEL с IC(50)=400 нМ. Кроме того, CYT387 избирательно подавлял in vitro рост эритроидных колоний, содержащих JAK2V617F, у пациентов с истинной полицитемией (PV), эффект, который ослаблялся экзогенным эритропоэтином. В целом, наши данные показывают, что селективный ингибитор JAK1/JAK2 CYT387 обладает потенциалом для эффективного лечения MPN, содержащего мутированные аллели JAK2 и MPL.

Похожие статьи

• TG101209, низкомолекулярный селективный ингибитор киназы JAK2, сильно ингибирует мутации JAK2V617F и MPLW515L/K, связанные с миелопролиферативным расстройством.

  Парданани А., Худ Дж., Лашо Т., Левин Р.Л., Мартин М.Б., Норонья Г., Финке С., Мак К.С., Меса Р., Чжу Х., Солл Р., Гиллиленд Д.Г., Теффери А. Парданани А. и др. Лейкемия. 2007 авг; 21 (8): 1658-68. doi: 10.1038/sj.leu.2404750. Epub 2007 31 мая. Лейкемия. 2007. PMID: 17541402

• Ингибитор киназы JAK CP-690,550 подавляет рост клеток истинной полицитемии человека, несущих мутацию JAK2V617F.

  Маншоури Т., Кинтас-Кардама А., Нуссенцвейг Р.Х., Гайквад А., Эстров З., Прчал Дж., Кортес Дж.Е., Кантарджян Х.М., Верстовсек С. Маншури Т. и др. Онкологические науки. 2008 г., июнь; 99(6):1265-73. doi: 10.1111/j.1349-7006.2008.00817.x. Онкологические науки. 2008. PMID: 18482053 Бесплатная статья ЧВК.

• Доклиническая характеристика атипримода, нового ингибитора JAK2 и JAK3.

  Квинтас-Кардама А., Маншоури Т., Эстров З., Харрис Д., Чжан Ю., Гайквад А., Кантарджян Х.М., Верстовсек С. Квинтас-Кардама А. и др. Инвестируйте в новые лекарства. 2011 окт; 29 (5): 818-26. doi: 10.1007/s10637-010-9429-z. Epub 2010 7 апр. Инвестируйте в новые лекарства. 2011. PMID: 20372971 Бесплатная статья ЧВК.

• MPLW515L представляет собой новую соматическую активирующую мутацию при миелофиброзе с миелоидной метаплазией.

  Пикман Ю., Ли Б.Х., Мерчер Т., Макдауэлл Э. , Эберт Б.Л., Гозо М., Кукер А., Верниг Г., Мур С., Галинский И., ДеАнджело Д.Дж., Кларк Дж.Дж., Ли С.Дж., Голуб Т.Р., Уодли М., Гиллиленд Д.Г., Левин РЛ. Пикман Ю. и др. ПЛОС Мед. 2006 г., июль; 3 (7): e270. doi: 10.1371/journal.pmed.0030270. ПЛОС Мед. 2006. PMID: 16834459 Бесплатная статья ЧВК.

• HLA-G отключает передачу сигналов рецептора эритропоэтина посредством дефосфорилирования JAK2 и JAK2 V617F: клиническая значимость при истинной полицитемии.

  Менье С., Гийяр С., Кассинат Б., Кароселла Э.Д., Руас-Фрейсс Н. Меньер С. и соавт. Лейкемия. 2008 март; 22(3):578-84. doi: 10.1038/sj.leu.2405050. Epub 2007 6 декабря. Лейкемия. 2008. PMID: 18059484

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

• Ингибиторное нацеливание на ось cGAS-STING-TBK1: новые стратегии терапии аутоиммунных заболеваний.

  Чжан М., Цзоу Ю., Чжоу С., Чжоу Дж. Чжан М. и др. Фронт Иммунол. 2022, 12 сентября; 13:954129. doi: 10.3389/fimmu.2022.954129. Электронная коллекция 2022. Фронт Иммунол. 2022. PMID: 36172373 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

• Всесторонний обзор одобренных во всем мире ингибиторов JAK.

  Шавки А.М., Алмалки Ф.А., Абдалла А.Н., Абделазим А.Х., Гауда А.М. Шоуки А.М. и соавт. Фармацевтика. 2022 6 мая; 14 (5): 1001. doi: 10.3390/фармацевтика14051001. Фармацевтика. 2022. PMID: 35631587 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

• Доклинические исследования флонолтиниба малеата, нового ингибитора JAK2/FLT3, в лечении миелопролиферативных новообразований, индуцированных JAK2 ^V617F .

  Ху М, Ян Т, Ян Л, Ню Л, Чжу Дж, Чжао А, Ши М, Юань Х, Тан М, Ян Дж, Пей Х, Ян З, Чен Ц, Е Х, Ню Т, Чен Л. Ху М и др. Рак крови J. 2022 7 марта; 12 (3): 37. doi: 10.1038/s41408-022-00628-2. Рак крови Дж. 2022. PMID: 35256594 Бесплатная статья ЧВК.

• Джакинибы на все руки: ингибирование передачи сигналов цитокинов при иммуноопосредованных патологиях.

  Александр М., Луо Ю., Раймонди Г., О'Ши Дж.Дж., Гадина М. Александр М и др. Фармацевтика (Базель). 2021 30 декабря; 15(1):48. дои: 10.3390/ph25010048. Фармацевтика (Базель). 2021. PMID: 35056105 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

• Ингибиторы Jak2 второго поколения для прогрессирующего рака предстательной железы: готовы ли мы к клинической разработке?

  Beinhoff P, Sabharwal L, Udhane V, Maranto C, LaViolette PS, Jacobson KM, Tsai S, Iczkowski KA, Wang L, Hall WA, Dehm SM, Kilari D, Nevalainen MT. Бейнхофф П. и соавт. Раков (Базель). 2021 17 октября; 13 (20): 5204. дои: 10.3390/раки13205204. Раков (Базель). 2021. PMID: 34680353 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

Просмотреть все статьи "Цитируется по"

Типы публикаций

термины MeSH

вещества

Экспансия in vitro эритроидных клеток-предшественников у пациентов с истинной полицитемией приводит к уменьшению аллеля JAK2 V617F

. 2007 Апрель; 35 (4): 587-95.

doi: 10. 1016/j.exphem.2006.12.007.

Амос Гайквад ¹ , Роберто Нуссензвейг, Энли Лю, Стивен Готтшалк, КоТунг Чанг, Йозеф Т. Прчал

принадлежность

• ¹ Отделение детской онкогематологии, Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас, США.

• PMID: 17379069
• PMCID: ЧВК1931508
• DOI: 10.1016/ж.экспем.2006.12.007

Бесплатная статья ЧВК

Амос Гайквад и др. эксп Гематол. 2007 Апрель

Бесплатная статья ЧВК

. 2007 Апрель; 35 (4): 587-95.

doi: 10.1016/j.exphem.2006.12.007.

Авторы

Амос Гайквад ¹ , Роберто Нуссенцвейг, Энли Лю, Стивен Готтшалк, КоТунг Чанг, Йозеф Т. Прчал

принадлежность

• ¹ Отделение детской онкогематологии, Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас, США.

• PMID: 17379069
• PMCID: PMC1931508
• DOI: 10. 1016/ж.экспем.2006.12.007

Абстрактный

Цели: Трансверсия G>T в тирозинкиназе JAK2 (V617F) была зарегистрирована более чем у 80% пациентов с истинной полицитемией (ИП). Текущие данные свидетельствуют о том, что соматическая мутация JAK2 (V617F) участвует в патогенезе PV, поскольку она придает эритропоэтин-независимую пролиферацию эритроидным клеткам-предшественникам. Однако возникло несколько оставшихся без ответа вопросов относительно важной роли JAK2(V617F), поскольку 1) это не доминантная мутация, 2) она не является PV-специфичной, поскольку обнаруживается при некоторых миелопролиферативных заболеваниях, и 3) некоторые (примерно 20% ) У пациентов с PV отсутствует мутация JAK2 (V617F). Мы исследовали относительную частоту JAK2 (V617F) в предшественниках PV, размноженных in vitro.

Методы: Экспансия эритроидных предшественников из мононуклеарных клеток in vitro была оптимизирована. Частоту аллеля JAK2(V617F) измеряли с помощью аллель-специфической полимеразной цепной реакции в реальном времени. Клонирование осуществлялось по установленной процедуре.

Полученные результаты: Экспансия in vitro эритроидных предшественников ВВ и дифференцированных дендритных клеток приводила к снижению частоты аллеля JAK2(V617F) по сравнению с гранулоцитами или CD235(+) эритроидными предшественниками. Анализ клональности показал, что, хотя гранулоциты этих пациентов с ИП были клональными, расширенные эритроидные клетки были поликлональными. Однако эритроидные предшественники PV, размноженные in vitro, по-прежнему обладали примерно вдвое повышенной пролиферативной способностью по сравнению с эритроидными предшественниками здоровых людей. Эритропоэтин предпочитает клетки без аллеля JAK2(V617F). Дендритные клетки у каждого третьего пациента оставались клональными.

Вывод: Мутация JAK2(V617F) не обеспечивает преимуществ пролиферативной/выживательной активности клона PV во время экспансии in vitro. Эти данные свидетельствуют о том, что мутация JAK2(V617F) играет важную роль в биологии ИП, однако она может не быть событием, инициирующим ИП.

Цифры

Рисунок 1

(A) Проточный цитометр с флуоресцентным активатором…

Рисунок 1

(A) Анализ проточной цитометрией с флуоресцентным активатором in vitro размноженных эритроидных предшественников: мононуклеарные…

(A) Анализ с помощью проточного цитометра с флуоресцентным активатором in vitro размноженных эритроидных клеток-предшественников: Мононуклеарные клетки выделяли у пациентов с PV и размножали, как описано в Методах. Около 5 × 10 9Клетки 0009 5 окрашивали PE-конъюгированными антителами против CD235A (гликофорин) и FITC-конъюгированными антителами против CD71 человека (трансферриновый рецептор). Области с R2 по R6 определяются характерным рисунком окрашивания эритроидных клеток. Это примитивные клетки-предшественники плюс зрелые BFU-E и CFU-E в R2 (CD71 med CD235Al ow ), проэритробласты и ранние базофильные эритробласты в R3 (CD71 high CD235A low ), ранние и поздние базофильные эритробласты в R4 (CD71 high CD235A high ), полихроматофильные и ортохроматофильные эритробласты в R5 (CD71 med CD235A high ) и поздние ортохроматофильные эритробласты и ретикулоциты в R6 (CD71 2087 high 285A6 93028 low 93028). (B) Процент JAK2 ^V617F в гранулоцитах и ​​ in vitro размноженных эритроидных предшественников: Гранулоциты (GNC) были выделены из периферической крови пациентов с PV. ДЖАК2 ^В617Ф измеряли в геномной ДНК гранулоцитов, а также in vitro размноженных эритроидных предшественников. M и F представляют пациентов мужского и женского пола соответственно.